环境样品中甲肝病毒的快速检测

环境样品中甲肝病毒的快速检测 RAPID DETECTION OF HAV IN ENVIRONMENTAL SAMPLES BY PCR TECHNOLOGY 胡家芬 1 2 first-author 徐询 1 2 张楚瑜 1 2 武汉大学病毒及分子生物学系 武汉大学病毒及分子生物学系 武汉大学病毒及分子生物学系 国家海洋局第三海洋研究所 武汉大学病毒及分子生物学系 国家海洋局第三海洋研究所 < 正 > 本文利用PCR技术对水样及淤泥样品中的甲肝病毒进行了快速检测,结果显示出这一方法具有简便、快速、可靠、效率高等优点.1 材料和方法1.1 样品和试剂:水样及淤泥样皆取于上海吕泗海域不同的采样点,分别编号为c～j;PCR仪购自PE Cetus;Primer由中国科技大学合成;逆转录酶为Bethesda Research Laboratories的产品;Taq酶购自复旦大学和华美公司.1.2 样品的处理:1)水样:取水样约 5L按张楚瑜等建立的方法进行逐步浓缩,置于0.lmol·L -1 PBS（pH7.2）透析液中过夜（4℃）,其间换三次PBS,蔡氏滤器（滤膜直径0.22nm）除菌,分装于小青瓶中,-20℃保存.2)淤泥:前处理见张楚瑜等的方法,将逐步浓缩后的样品溶液的pH调至8.0,1.0×10 4 rpm离心30min（4℃）,取上清液调pH至7.0,按前述方法透析过夜.取透析后的样品2mL,用等体积的氯仿抽提,苯酚抽提两次,等体积的异丙醇沉淀核酸（-50℃,20min）,1.5×10 4 rpm < 正 > 本文利用PCR技术对水样及淤泥样品中的甲肝病毒进行了快速检测,结果显示出这一方法具有简便、快速、可靠、效率高等优点.1 材料和方法1.1 样品和试剂:水样及淤泥样皆取于上海吕泗海域不同的采样点,分别编号为c～j;PCR仪购自PE Cetus;Primer由中国科技大学合成;逆转录酶为Bethesda Research Laboratories的产品;Taq酶购自复旦大学和华美公司.1.2 样品的处理:1)水样:取水样约 5L按张楚瑜等建立的方法进行逐步浓缩,置于0.lmol·L -1 PBS（pH7.2）透析液中过夜（4℃）,其间换三次PBS,蔡氏滤器（滤膜直径0.22nm）除菌,分装于小青瓶中,-20℃保存.2)淤泥:前处理见张楚瑜等的方法,将逐步浓缩后的样品溶液的pH调至8.0,1.0×10 4 rpm离心30min（4℃）,取上清液调pH至7.0,按前述方法透析过夜.取透析后的样品2mL,用等体积的氯仿抽提,苯酚抽提两次,等体积的异丙醇沉淀核酸（-50℃,20min）,1.5×10 4 rpm R447 1993-01-01 2021-04-01 1