根癌农杆菌的高效电激转化

根癌农杆菌的高效电激转化 EFFICIENT TRANSFORMATION OF AGROBACTERIUM TUMEFACIENS BY ELECTROPORATION 施华中 1 2 3 first-author 杨弘远 1 2 3 周嫦 1 2 3 陈正华 1 2 3 武汉大学生命科学学院 武汉大学生命科学学院 College of Life Sciences,Wuhan University College of Life Sciences,Wuhan University 中国科学院遗传研究所 中国科学院遗传研究所 武汉大学生命科学学院中国科学院遗传研究所 武汉大学生命科学学院中国科学院遗传研究所 利用电激法将双元载体质粒ＰＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率．探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达．结果表明：根癌农杆菌电激转化的最适电激条件为１１ｋＶ／ｃｍ，２１．５μＦ，电场强度是影响转化效率的关键因素．当质粒ＤＮＡ浓度从０．２ｍｇ／Ｌ增加至０．６ｍｇ／Ｌ时，转化效率呈线性增加．细菌密度对转化效率也有一定影响．最高转化效率为每μｇ质粒ＤＮＡ１．７×１０５转化子．组织化学反应证实ＣａＭＶ３５Ｓ能启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中表达． Efficient transformation of Agrobacterium tumefaciens AGL-1 by electroporation was performed using the binary vector pBI 121 that contain β-glucuronidase（GUS）gene underthe control of the CaMV35S promoter.The optimal electroporatlon condition for plasmid transfer was obtained at 11 kV/cm and 21. 5μF,the field strength showed important influence on the transformation efficiency,The concentration of plasmid DNA and the density Of bacteria in the DNA/bacteria suspension also affected the transformation efficiency.Histochemical detection of GUS indicated that the transformants are capable of expressing GUS gene underthe control of the CaMV35S promoter. 电激 转化 根癌农杆菌 electroporation Transformation Agrobacterium tumefaciens Q939.114.07 国家自然科学基金(61672102) 1995-06-01 2021-04-01 6