寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因

谢毅; 肖谷田; 王顺德; 孙筱清; 张婕; 徐万祥; 吴小舟

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寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因

更新时间：2021-04-02

- 寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因
- OLIGONUCLEOTIDE DIRECTED MULTI POINT SITE SPECIFIC MUTAGENESIS ——Five point Site specific Mutagenesis for Modifying Subtilisin E Gene
- 武汉大学学报（理学版） 1997年第2期
- 作者机构：
  
  1. 复旦大学遗传工程国家重点实验室
  2. 上海市计划生育科学研究所
  3. 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海市计划生育科学研究所
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  “联合国工业发展组织”（UNIDO）资助
- DOI：
  中图分类号： Q78
- 纸质出版日期：1997-02-01，
- 稿件说明：
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[1]谢毅,肖谷田,王顺德,孙筱清,张婕,徐万祥,吴小舟.寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因[J].武汉大学学报(自然科学版),1997(02):92-95+97.

Xie Yi, Xiao Gutian, Wang Shunde, et al. OLIGONUCLEOTIDE DIRECTED MULTI POINT SITE SPECIFIC MUTAGENESIS ——Five point Site specific Mutagenesis for Modifying Subtilisin E Gene[J]. 1997,(2).
[1]谢毅,肖谷田,王顺德,孙筱清,张婕,徐万祥,吴小舟.寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因[J].武汉大学学报(自然科学版),1997(02):92-95+97. DOI：

Xie Yi, Xiao Gutian, Wang Shunde, et al. OLIGONUCLEOTIDE DIRECTED MULTI POINT SITE SPECIFIC MUTAGENESIS ——Five point Site specific Mutagenesis for Modifying Subtilisin E Gene[J]. 1997,(2). DOI：

摘要

用５个化学合成的寡聚脱氧核苷酸片段作为诱变引物，对枯草杆菌蛋白酶Ｅ基因（ＡｐｒＥ）同时进行体外诱变．转化子经打点杂交及温度梯度洗膜法筛选出了若干在５个预定位点同时突变了的突变子，其突变效率达到５０％．同时还得到了１个四点突变的突变子．突变子经ＤＮＡ测序分析，充分肯定了突变的可靠性

Abstract

This article represented a simple and efficient method for multi point site specific mutagenesis. The procedure includes: the annealing of a single stranded uracil containing DNA template with five oligonucleotide fragments at a time

in vitro synthesis and ligation

transforming JM109 of E.coli.

screening mutants by washing the filter at an increasing temprature. Using the approach

we have succeeded in obtaining several five point mutants in subti lisin E gene.A four point mutant was obtained at the same time. The result was confirmed by DNA sequenceing.

关键词

定点突变枯草杆菌蛋白酶E寡聚脱氧核苷酸

Keywords

multi point site specific mutagenesissubtilisin Eoligonucleotide

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