嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达

嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达 Cloning and Expression of Promoter from An Alkalophilic Bacillus sp. NTT89 in Escherichia coli 王玲燕 WANG Lin\|yan 1 first-author 曹军卫 CAO Jun\|wei 1 刘同明 LIU Ton\|min 1 张小青 ZHANG Xiao\|qin 1 武汉大学生命科学学院,武汉,430072 武汉大学生命科学学院,武汉,430072 College of Life Sciences, Wuhan University College of Life Sciences, Wuhan University 报导了以启动子探测质粒 p KK2 32 - 8为载体克隆嗜碱芽孢杆菌 NTT89启动子的研究 .用限制性内切酶 Hind 分别消化嗜碱芽孢杆菌 NTT89染色体 DNA和质粒 p KK2 32 - 8,在体外重组 ,转化大肠杆菌 DH5 α感受态细胞 ,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性平板上筛选转化子 ,结果从 NTT89染色体 DNA中克隆到一系列带有启动子活性的 DNA片段 ,并在大肠杆菌中得到表达 ,这些转化子抗氯霉素水平在 34～ 5 0 0 mg/ L 不等 ,随机挑选10个转化子 ,提取其重组质粒进行限制性酶切 ,表明转化子中的重组质粒外源片段插入的效率很高 ,插入片段大小在 5 0 0～ 5 5 0 0 bp之间 ,通过地高辛标记的点杂交和 Southern杂交均证明重组质粒上插入的具启动子功能的 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌的染色体 DNA. Promoter function fragmants from Alkalophilic Bacillus sp.NTT89 were cloned in Escherichia coli using a promoter\|probe plasmid pKK232\|8.Forty\|tow clones were obtained,whose level of resistance to Cm ranged from 34 to 500 mg/L.Restriction enzyme analysis revealed that the size of inserted fragments ranged from 500\|5500 bp.By using Dot blotting and Southern blotting,we found that the inserted fragments were indeed from Alkalophilic Bacillus sp.NTT89. 嗜碱芽孢杆菌 启动子 表达 alkalophilic Bacillus promoter expression 10.14188/j.1671-8836.2000.02.033 Q933 2000-02-01 2021-04-01 2