海菖蒲浸提液对球形棕囊藻的抑制效应

海菖蒲浸提液对球形棕囊藻的抑制效应 Inhibitory Effect of Enhalus acodoides Extracts on Phaeocystis globosa first-author 肖晗, 男, 硕士生，现从事海洋生态学研究. E-mail: acehsiaohan@gmail.com 肖晗, 男, 硕士生，现从事海洋生态学研究. E-mail: acehsiaohan@gmail.com acehsiaohan@gmail.com corresp 段舜山, E-mail:tssduan@jnu.edu.cn 段舜山, E-mail:tssduan@jnu.edu.cn tssduan@jnu.edu.cn 暨南大学 水生生物研究中心/水体富营养化与赤潮防治广东普通高校重点实验室，广东 广州 510632 暨南大学 水生生物研究中心/水体富营养化与赤潮防治广东普通高校重点实验室，广东 广州 510632 Research Center of Hydrobiology/Key Laboratory of Eutrophication and Red Tide Prevention of Guangdong Higher Education Institutes, Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong, China Research Center of Hydrobiology/Key Laboratory of Eutrophication and Red Tide Prevention of Guangdong Higher Education Institutes, Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong, China 为探索海菖蒲( Enhalus acodoides )浸提液对有害赤潮藻的抑制效果，分别采用海菖蒲植株干粉的人工海水、无水乙醇和正己烷3种溶剂(极性由强到弱)提取液对球形棕囊藻( Phaeocystis globosa )进行抑制效应实验，结果表明：1)水浸提液在浓度为10 g·L -1 时对球形棕囊藻有显著的抑制效应( p < 0.05)，最高抑制率为94.72%，乙醇浸提液在浓度为50 mg·L -1 时对球形棕囊藻有显著抑制效应( p < 0.05)，最高抑制率为77.72%，正己烷浸提液对球形棕囊藻无显著抑制效应( p > 0.05)；海菖蒲中能够抑制球形棕囊藻生长的物质应为极性物质；2)水浸提液能够干扰球形棕囊藻的抗氧化系统，使其藻细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量显著升高( p < 0.05)；3) 0.25%(体积分数)的二甲基亚砜(DMSO)对球形棕囊藻生长无显著抑制效应( p ＞0.05). To explore the inhibitory effect of extracts of Enhalus acodoides ( E. acodoides ) on harmful red tide algae, three solvents including artificial seawater, ethanol and n -hexane(polarity from strong to weak) were used to extract the algae-reactive substances in the E. acodoides and study the inhibitory effect on Phaeocystis globosa ( P. globosa ). The results show that: 1) Aqueous extract of E. acodoides significantly inhibits P. globosa ( p < 0.05), and the highest inhibition rate of the aqueous extract at 10 g·L -1 reaches 94.72%; Ethanol extract significantly inhibits P. globosa ( p < 0.05) at a concentration of 50 mg·L -1 , and the highest inhibition rate of the ethanol extract reaches 77.72%; The n -hexane extract has no significant inhibitory effect on P. globosa ( p > 0.05) at the experimental concentration; the components in E. acodoides inhibiting the growth of P. globosa should be polar substances; 2) Aqueous extract can interfere with the antioxidant system of P. globosa , and significantly increase the activity of superoxidededismutas (SOD) and the content of malondial dehyde (MDA); 3) Dimethyl sulfoxide (DMSO) below 0.25% ( V / V ) has no significant inhibitory effect on the growth of P. globosa ( p > 0.05). 海草 海菖蒲 水浸提液 球形棕囊藻 赤潮 化感作用 seagrass Enhalus acodoides aqueous extract Phaeocystis globosa harmful algal blooms(HABs) allelopathy 引言 1 赤潮(harmful algal blooms, HABs)因严重破坏生态系统平衡，威胁人类健康，阻碍水产养殖和旅游业的发展，已成为全球性环境灾难 [ 1 1 ] .探索经济有效的赤潮防治方法对于保护海洋环境、保障养殖业持续发展以及维护人类健康具有重要意义.由球形棕囊藻( Phaeocystis globosa ， P. globosa )引发的赤潮于1998年10月在我国首次被发现.球形棕囊藻隶属于定鞭金藻门，主要以群体形式出现，显微镜下能观察到成千上万个细胞包埋在凝胶状的基质中形成中空的球形群体，直径能达到3 cm [ 2 2 ] .球形棕囊藻爆发性增殖时会产生胶质和溶血毒素 [ 3 3 ] ，同时大量消耗水体中的氧，引起鱼类和浮游动物中毒或窒息死亡 [ 4 4 ] ，在衰退期会产生大量白色泡沫并释放能够形成酸雨的二甲基丙磺酸和二甲基硫醚等化学物质 [ 5 5 ] .因此，球形棕囊藻赤潮的有效治理成为亟待解决的问题.生物防治赤潮的方法具有环境友好、成本低、无二次污染等优点 [ 6 6 ~ 9 9 6~9 ] .目前，利用水生植物的化感作用控制水华已经成为生物防治赤潮领域新的研究热点 [ 10 10 , 11 11 ] .一些淡水水生植物，如金鱼藻 [ 8 8 ] 、黑藻 [ 8 8 ] 、水浮莲 [ 12 12 ] 、眼子菜 [ 13 13 ] 、狐尾藻 [ 10 10 ] 等能够产生化感物质对某些淡水微藻进行抑制；一些大型海藻，如石莼 [ 9 9 ] 、红毛藻 [ 14 14 ] 能抑制海洋微藻生长；一些海草，如大叶藻( Zostera marina ) [ 15 15 ] 、波喜荡( Posidonia oceanica ) [ 16 16 ] 等也能够产生化感物质抑制周围植物而取得生长优势.海草床生态系统是一种典型的海洋生态系统 [ 17 17 ] ，除了北冰洋沿岸，全世界几乎所有的海岸均有分布 [ 18 18 ] .但是，关于利用海草浸提液抑制海洋赤潮藻的研究还较少. 有研究发现 [ 19 19 ] ，海菖蒲( Enhalus acodoides )水浸提液对锥状斯氏藻生长抑制率达到95%以上.海菖蒲是单子叶水鳖科(Hydrocharitaceae)海草，具有植株大、分布广、生长速度快等特点 [ 20 20 , 21 21 ] ，为近岸海域优势物种 [ 21 21 ~ 23 23 21~23 ] .本文研究了海菖蒲干粉的人工海水、无水乙醇和正己烷3种极性不同的溶剂浸提液(极性由强到弱)对球形棕囊藻生长的影响，以期为进一步利用海草植物资源防治赤潮、提高近海水域的环境生态效益提供新的思路. 实验部分 1 材料及试剂 2 实验所用球形棕囊藻藻种由暨南大学水生生物研究中心藻种室提供.赤潮藻在光照培养箱中采用改进过的f/2培养基 [ 24 24 ] 静置培养，光照强度100 μmol·m 2 ·s -1 ，光暗比12L:12D，培养温度(23±1) ℃，盐度30 PSU，初始pH 8.0±0.02，每天摇晃3次防止藻细胞贴壁生长，测定藻细胞密度.实验前3 d将对数期藻细胞接种到高温灭菌的培养基中以适应生长环境. 海菖蒲采集于海南省陵水县新村湾(E109°59′34″，N18°23′59″).新鲜海菖蒲叶片采集出水后迅速用蒸馏水冲洗并用毛刷刷去其表面附着的藻类与其他生物，然后置于烘箱中60 ℃烘干至恒质量，再用研钵研磨成粉末，过100目筛网后得到海菖蒲干粉，4 ℃保存备用. 试剂：无水乙醇(分析纯)、正己烷(anpel，色谱纯)、二甲基亚砜(DMSO，色谱纯)、甲醛(色谱纯)、三氯乙酸(TCA，分析纯)、硫代巴比妥酸(BR纯)等均为国产试剂；配制人工海水 [ 25 25 ] 所用试剂为广州化学试剂厂生产. 主要的仪器 2 仪器：Accuri C6型流式细胞仪(BD公司)；Synergy H1M型全功能酶标仪(Bio Tek公司)；UV-2450型紫外可见分光光度计(岛津公司)；Sorvall Stratos型高速冷冻离心机(Thermo Scientific公司)；UH-950B型超声波破碎仪(Auto Science公司)；5401-CC275TL2H型光照培养箱(杭州雪中炭恒温技术有限公司)；SW-CJ-1F型超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司). 实验方法 2 海菖蒲干粉浸提液母液的制备 3 准确称取40 g海菖蒲干粉，加至经高温灭菌的3 L烧杯中，加入2 L人工海水，用无菌封口膜密封后置于恒温水浴锅中，于25 ℃浸提48 h，离心，取上清液，用Millipore 0.22 μm醋酸纤维滤膜过滤去除微生物，得到实验用浸提母液，浓度为20 g·L -1 ，4 ℃保存备用.过滤过程在超净工作台上无菌条件下进行. 海菖蒲乙醇与正己烷浸提液的制备 3 准确称取10 g海菖蒲干粉，加入500 mL经高温灭菌的锥形瓶中，加入300 mL乙醇或正己烷，密封后室温23 ℃浸渍提取10 d，经Millipore有机相0.22 μm滤纸过滤后，滤液经旋转蒸发(35 ℃)，浓缩至1~2 mL，氮气吹干，得到海菖蒲乙醇浸提液或海菖蒲正己烷浸膏，再用0.25%( m / V )DMSO作助溶剂复溶得到200 mg·L -1 母液. 水浸提液对球形棕囊藻的抑制实验 3 在200 mL含不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10 g·L -1 )水浸提液的培养液中培养球形棕囊藻，每种浓度水浸提液做3组平行实验.空白对照组中不添加水浸提液，加入相同体积的灭菌人工海水.球形棕囊藻起始培养密度5×10 4 mL -1 ，培养时间8 d.从接种开始每间隔24 h取藻液2 mL，用1%甲醛固定之后用流式细胞仪检测细胞密度，按(1)式计算抑制率 [ 26 26 ] ： http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257359&type= http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257359&type=small http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257359&type=middle 其中， N (mL -1 )为样品的藻细胞密度； N 0 (mL -1 )为空白对照组的藻细胞密度. 乙醇浸提液与正己烷浸提液对球形棕囊藻的抑制实验 3 海菖蒲乙醇浸提液与正己烷浸提液对球形棕囊藻抑制实验采用无菌48孔板培养，培养体系为1.7 mL.浸提液浓度设置为0、6.25、12.5、25和50 mg·L -1 ，每个浓度做3组平行实验.空白对照组中不添加浸提液，加入相同体积的灭菌人工海水和对应浓度的DMSO.球形棕囊藻起始培养密度7.5×10 5 mL -1 ，培养时间12 d.从接种开始每间隔48 h取藻液100 μL，用1%甲醛固定后用流式细胞仪检测细胞密度，按(1)式计算抑制率. DMSO对球形棕囊藻生长的影响 3 用DMSO作为助溶剂，对球形棕囊藻的生长进行剂量效应测试.设置0%(空白)、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%、0.3%、0.4%、0.45%( V / V )共计9个浓度梯度，每间隔24 h用酶标仪测一次藻液在680 nm波长处的吸光度，通过统计学软件计算无可观察效应剂量(no-observed-effect level, NOEL). 超氧化物歧化酶的检测 3 采用四氮唑蓝(NBT)光化学还原反应法检测超氧化物歧化酶(SOD)，考察球形棕囊藻中超氧化物歧化酶活性.取藻细胞10 mL，4 ℃离心(3 500 r·min -1 ，10 min)，弃上清液，收集藻细胞用10% PBS(pH 7.0)冲洗2次除去表面培养基，用10% PBS缓冲溶液(pH 7.0)按照质量体积比( m / V )=1:10配制10%藻悬液.藻悬液用超声波冰浴破碎5 min(每破碎5 s间隔5 s，200 W)得到10%藻细胞破碎液，4 ℃离心(10 000 r·min -1 ，15 min).取上清液于1.5 mL EP管中得到藻细胞酶提取液，4 ℃保存.每个样品进行3个测试和3个空白对照.在测试试管中加入1.5 mL 5.0×10 -3 mol·L -1 PBS缓冲溶液(pH 7.8)，0.3 mL 7.5×10 -5 mol·L -1 NBT，0.3 mL 1.3×10 -2 mol·L -1 DL-甲硫氨酸，0.3 mL 2.0×10 -6 mol·L -1 核黄素，0.3 mL 1.0×10 -6 mol·L -1 乙二胺四乙酸(EDTA)，藻细胞酶提取液0.05 mL，去离子水0.25 mL，混匀，将空白对照管置于暗处，测试管置于25 ℃荧光灯下4 000 lx光照15 min，测其在560 nm波长处的吸光度 [ 27 27 , 28 28 ] ，按(2)式计算SOD活力(U·g -1 )： http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257363&type= http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257363&type=small http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257363&type=middle 式中， A 0 为空白对照的吸光度； A s 为样品的吸光度. 丙二醛的检测 3 丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应的产物，可以用来衡量过氧化反应的程度 [ 29 29 ] ，因此可以通过测定其浓度变化反映脂质过氧化水平的改变和外源性化合物对机体组织脂质过氧化伤害的程度.本文利用硫代巴比妥酸(TBA)法测定藻细胞中的MDA含量 [ 30 30 ] .取10 mL藻液4 ℃离心(6 000 r·min -1 ，10 min)，弃上清液，收集藻细胞，用10% PBS缓冲溶液(pH 7.0)冲洗2次去除表面培养基.藻细胞用2 mL 10% ( m / V )三氯乙酸匀浆，4 ℃离心(6 000 r·min -1 ，10 min).将1.0 mL上清液与1.0 mL TBA(0.6% TBA溶于10%三氯乙酸)溶液混合，混合物沸水浴40 min，冷却至室温后4 ℃离心(6 000 r·min -1 ，10 min)，测其在450、532 nm和600 nm波长处的吸光度 A ，按(3)式计算MDA含量： http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257369&type= http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257369&type=small http://html.publish.founderss.cn/rc-pub/api/common/picture?pictureId=4257369&type=middle 统计分析 3 使用FlowJo软件对流式细胞仪数据进行分析；使用GraphPad Prism 7和Microsoft Excel 2016软件完成数据统计分析；通过单因素方差分析(one-way ANOVA)检验处理组与对照组之间的差异显著性， p ＜0.05时，表示差异显著； p ＜0.01时，表示差异极显著. 结果与讨论 1 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻生长的影响 2 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻藻细胞密度的影响如 图 1A 图 1A 所示.相对于空白对照组，0.5 g·L -1 处理组对球形棕囊藻生长表现出促进作用；2.5 g·L -1 处理组在前5 d对球形棕囊藻的生长有促进作用，在第6 d后表现为抑制作用；5 g·L -1 和10 g·L -1 两个处理组均表现出明显的抑制作用.海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻藻细胞密度的抑制效应随其浓度的升高而增强，呈现出显著的剂量-抑制效应. 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻生长的抑制率如 图 1B 图 1B 所示.5 g·L -1 和10 g·L -1 两个处理组均显示出显著的抑制作用( p < 0.05)，抑制率随培养时间的延长而升高，且10 g·L -1 处理组抑制率始终高于5 g·L -1 处理组抑制率，在第8 d达到最高值94.72%.0.5 g·L -1 处理组在8 d内均表现为促进作用，在第3 d的促进作用最明显；2.5 g·L -1 处理组第6 d前表现为促进作用，之后进入抑制状态，第8 d的抑制率达到37.18%.海菖蒲水浸提液中含有抑藻成分，同时含有丰富的营养物质 [ 31 31 ] ，而藻细胞具有一定的自我修复和适应外界环境变化的能力 [ 32 32 ] ，故低浓度(0.5 g·L -1 )处理组能够促进球形棕囊藻生长，而较高浓度(2.5 g·L -1 )处理组由于抑藻物质浓度超出了藻细胞自我修复的范围，对藻细胞造成了损伤，故表现为先促进后抑制.廖和平 [ 33 33 ] 发现龙须菜水浸提液对锥状斯氏藻、海洋原甲藻和赤潮异湾藻有低浓度时促进、高浓度时抑制的实验现象，孙志伟 [ 25 25 ] 也发现红树植物海漆水浸提液在低浓度时能够促进球形棕囊藻生长，高浓度时则产生抑制作用，与本文实验结果相吻合. 海菖蒲乙醇浸提液对球形棕囊藻生长的影响 2 海菖蒲乙醇浸提液对球形棕囊藻藻细胞密度的影响如 图 2A 图 2A 所示.相对于空白对照组，50 mg·L -1 处理组对球形棕囊藻生长表现出明显的抑制作用，其他处理组对球形棕囊藻生长均无显著影响( p > 0.05). 海菖蒲乙醇浸提液对球形棕囊藻的生长抑制率如 图 2B 图 2B 所示.50 mg·L -1 处理组抑制率在第4 d前持续上升，第4 d时达到最高值77.72%，第12 d时抑制率为54.36%.一些植物的醇类浸提液能够抑制赤潮藻生长 [ 34 34 ] ，并能影响赤潮藻细胞内叶绿素、蛋白质和多糖的含量 [ 35 35 ] .其中，黄酮类物质，如芦丁和槲皮素等对赤潮藻抑制效果较好 [ 36 36 ] .黄酮类化合物是一种多酚类物质，易溶于醇类等有机溶剂 [ 37 37 ] ，是高等植物的次级代谢产物 [ 38 38 ] ，能够破坏藻类细胞膜抑制微藻生长 [ 35 35 , 39 39 , 40 40 ] .海菖蒲含有丰富的黄酮类物质且对细菌等微生物有良好的抑制作用 [ 41 41 ] .因此，达到一定浓度的海菖蒲乙醇浸提液能够抑制球形棕囊藻的生长. 海菖蒲正己烷浸提液对球形棕囊藻生长的影响 2 海菖蒲正己烷浸提液对球形棕囊藻藻细胞密度以及抑制率的影响实验结果显示，相对于空白对照组，6.25、12.5、25 mg·L -1 和50 mg·L -1 处理组在12 d内对球形棕囊藻的生长均无显著抑制作用( p > 0.05).孙颖颖等 [ 35 35 ] 发现大型海藻浒苔的氯仿和石油醚等非极性溶剂浸提液对4种海洋赤潮藻均无显著抑制效果.化感作用发生的一个重要条件就是植物必须将其体内产生的化感物质释放到环境中影响目标生物的生长 [ 42 42 ] .海菖蒲生长在强极性的海水环境中，其化感物质须释放到海水中才起作用.而正己烷为非极性溶剂，根据相似相溶原理，正己烷浸提液中的溶质为非极性或弱极性并难溶于水的物质.因此，推测海菖蒲中能够抑制藻类生长的物质可能为极性物质. DMSO作为助溶剂对球形棕囊藻生长的影响 2 在人工海水中添加不同体积分数(0.05%~0.45%)DMSO作助溶剂测试其对球形棕囊藻生长的影响.结果显示，当DMSO的体积分数小于等于0.45%时，对球形棕囊藻生长的影响与对照组相比差异均不显著( p > 0.05).实验中助溶剂DMSO的体积分数选定为0.25%. 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻SOD活力的影响 2 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻SOD活力的影响如 图 3 图 3 所示.4个处理组的SOD活力均随培养时间增加而增加，在24 h时均显著高于空白对照组( p < 0.05);48 h时0.5 g·L -1 和2.5 g·L -1 处理组SOD活力与空白对照组相当，已不再处于高度氧化胁迫状态，而5 g·L -1 和10 g·L -1 处理组SOD活力显著高于空白对照组( p < 0.05)，仍处于高度氧化胁迫状态.植物在正常代谢过程中和各种环境胁迫下均能产生活性氧和自由基，而SOD能够清除活性氧和自由基，在一定范围内维持活性氧代谢平衡，保护细胞免受氧化损伤 [ 43 43 ] .外源性化合物进入生物细胞后会产生大量O 2- 、H 2 O 2 、OH - 等自由基 [ 28 28 ] ，因此，植物体在受到逆境胁迫时，SOD活力会有所升高 [ 44 44 ] .0.5 g·L -1 和2.5 g·L -1 处理组在48 h时已不再处于氧化胁迫状态，说明SOD清除了藻细胞内的活性氧和自由基，藻细胞进入快速生长状态，这与 图 1 图 1 中0.5 g·L -1 和2.5 g·L -1 处理组藻细胞密度在前48 h高于空白对照组的结果相吻合.而5 g·L -1 和10 g·L -1 处理组中藻细胞始终处于高度氧化胁迫状态，也与 图 1 图 1 中5 g·L -1 和10 g·L -1 处理组藻细胞密度始终低于空白对照组相吻合.因此，海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻构成氧化胁迫，球形棕囊藻能够抵御一定浓度的海菖蒲水浸提液. *** ：差异极显著( p < 0.001) *** : extremely significant differences( p < 0.001) 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻MDA含量的影响 2 海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻内MDA含量的影响如 图 4 图 4 所示.24 h和48 h时，所有处理组MDA含量均显著高于空白对照组( p < 0.05).0.5 g·L -1 和2.5 g·L -1 处理组在24 h时MDA含量升高，在48 h时MDA含量下降；5 g·L -1 和10 g·L -1 处理组中MDA含量均显著增加( p < 0.05)，且随处理时间增加而增加.空白对照组的SOD活力虽然随培养时间延长而有所升高( 图 3 图 3 )，但是空白对照组中MDA含量并未随培养时间产生显著变化( 图 4 图 4 )，说明空白对照组藻细胞膜结构未受到损伤.这可能是因为藻细胞密度上升，引起种内竞争加剧、SOD活力升高所导致. 图 4 图 4 中，所有处理组中MDA含量均显著增加( p < 0.05)，细胞膜被氧化说明海菖蒲水浸提液使球形棕囊藻细胞膜结构受到损伤 [ 45 45 ] .2.5 g·L -1 处理组中球形棕囊藻在48 h时的SOD活力与空白对照相比不显著( p > 0.05)，不再处于高度氧化胁迫状态，但是其膜结构已受到损伤，很可能是在第6 d就进入抑制状态并提前进入了平台期的原因.5 g·L -1 和10 g·L -1 海菖蒲水浸提液能使球形棕囊藻直接进入抑制状态，说明浸提液浓度是造成球形棕囊藻被抑制的重要因素. * ：差异显著( p < 0.05)； ** ：差异极显著( p < 0.01) * : significant differences ( p < 0.05); ** : extremely significant differences ( p < 0.01) 结论 1 本实验研究了海菖蒲水、乙醇和正己烷浸提液对球形棕囊藻藻细胞密度的影响，测试了海菖蒲水浸提液对球形棕囊藻SOD活性影响和藻细胞膜脂氧化水平，并考察了不同体积分数的助溶剂DMSO对球形棕囊藻生长的影响.结果表明：海菖蒲水浸提液和乙醇浸提液能够抑制球形棕囊藻生长，正己烷浸提液对球形棕囊藻生长抑制效果不显著；海菖蒲水浸提液能够影响球形棕囊藻SOD活力和MDA含量，并能使藻细胞膜脂氧化，使藻细胞处于氧化胁迫的状态；海菖蒲水浸提液的浓度是抑制球形棕囊藻生长的重要因素；0.25%(体积分数)的DMSO对球形棕囊藻生长无显著抑制效应( p < 0.05).强极性的水浸提液对球形棕囊藻有较好的抑制效果，弱极性的乙醇浸提液在高浓度下能够抑制球形棕囊藻生长，非极性的正己烷浸提液对球形棕囊藻抑制效果不明显，说明海菖蒲中能够抑制球形棕囊藻生长的物质应为极性物质，但具体是什么物质以及抑制机理尚不清楚，需要进一步对海菖蒲抑制赤潮藻的活性物质进行分离和鉴定. 参考文献 ANDERSON D M, CEMBELLA A D, HALLEGRAEFF G M. 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